图2 Hsc70敲低抑制破骨细胞生成

（A-B）TRAP染色显示，在RANKL刺激7天后，Hsc70敲低的RAW 264.7细胞中破骨细胞形成减少。比例尺，500 μm；n=3。（C-G）qRT-PCR分析RANKL刺激72 h后Hsc70敲低RAW 264.7细胞中Nfatc1、Ctsk、c-Fos和Acp5的mRNA水平，n=3。（H-I）RANKL刺激7天后Hsc70敲低RAW 264.7细胞的F-actin染色图像及F-actin环定量分析。比例尺，200 μm；n=3。（J-K）RANKL刺激10天后Hsc70敲低RAW 264.7细胞的骨吸收陷窝图像及陷窝面积定量分析。比例尺，200 μm；n=3。数据以均数±标准差表示。***p<0.001，**p<0.01，*p<0.05。

图3 HSC70通过IKKβ-NF-κB轴调控破骨细胞生成

（A）WB分析RANKL刺激的RAW 264.7细胞经ECH处理8 h后核内和胞质NF-κB p65蛋白水平，n=3。（B）免疫荧光染色及定量分析RANKL刺激的RAW 264.7细胞经ECH处理8 h后的NF-κB p65核转位。比例尺，25 μm。（C）RANKL刺激8 h后Hsc70敲低RAW 264.7细胞中核内和胞质NF-κB p65蛋白水平，n=3。（D）免疫荧光染色及定量分析RANKL刺激8 h后Hsc70敲低RAW 264.7细胞中的NF-κB p65核转位。比例尺，25 μm。（E）WB分析RANKL刺激的RAW 264.7细胞经ECH处理8 h后IKKβ和p-IκBα水平，n=3。（F）RANKL刺激8 h后Hsc70敲低RAW 264.7细胞中IKKβ和p-IκBα蛋白水平，n=3。（G）293T细胞经ECH（20 μM）处理不同时间后进行环己酰亚胺（CHX，50 μg/ml）追踪实验，并通过WB分析IKKβ蛋白水平，n=3。（H）Hsc70敲低RAW 264.7细胞经10 μg/ml CHX处理不同时间后IKKβ降解动力学，通过WB分析IKKβ蛋白水平，n=3。（I）RAW 264.7细胞先经MG-132处理，再暴露于ECH 8 h，检测并定量IKKβ相对蛋白水平，n=3。（J）293T细胞转染Myc-IKKβ和HA-Ub质粒48 h后，经ECH处理24 h并经MG-132处理8 h，进行共免疫沉淀实验。泛素化IKKβ用抗Myc微珠免疫沉淀，并用抗HA抗体检测，n=3。（K）293T细胞转染Myc-IKKβ和HA-Ub质粒24 h后，再转染靶向HSC70的siRNA 48 h，并经MG-132处理8 h，进行共免疫沉淀实验。泛素化IKKβ用抗Myc微珠免疫沉淀，并用抗HA抗体检测，n=3。数据以均数±标准差表示。***p<0.001，**p<0.01，*p<0.05。ns，差异无统计学意义。